植物病害研究NMT标准化方案
植物病害研究NMT标准化方案
一、视频资源
二、参考文献
C2017-033，王国梁/王毅，中国农科院/中国农业大学，Plos Pathogens，根，K+
The fungal pathogen Magnaporthe oryzae suppresses innate immunity by modulating a host potassium channel
F2011-014，PLANT CELL ENVIRON ，叶肉细胞，Ca2+/ K+
Plasma membrane Ca2+ transporters mediate virus-induced acquired resistance to oxidative stress
F2010-013，Planta，叶肉细胞，K+/Ca2+/H+
F2008-004，Plant Cell Physiology，叶肉细胞，Ca2+
Calcium Efflux as a Component of the Hypersensitive Response of Nicotiana benthamiana to Pseudomonas syringae
F2007-008，Planta，叶肉细胞，K+/H+
三、常测哪些指标
Ca2+、K+、H+
四、检测这些离子流、分子流，有什么生物学意义
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2）科研案例
水稻 CDS1编码 OsCNGC9，对水稻瘟病抗性具有正向调控作用。利用NMT检测不同处理条件下水稻叶肉细胞 Ca2+吸收速率，发现在 PAMPs刺激下，野生型（WT）叶肉细胞表现出强烈且迅速的Ca2+ 吸收。这说明： OsCNGC9 会介导水稻PTI的Ca2+吸收，而这种能力在cds1突变体中减弱。结合其他研究结果，证明信号级联将模式识别与钙通道活性联系起来，这是启动水稻 PTI和抗病性的必要条件。（Wang J, Liu X, Zhang A, et al. A cyclic nucleotide-gated channel mediates cytoplasmic calcium elevation and disease resistance in rice. Cell Res. 2019;29(10):820-831. doi:10.1038/s41422-019-0219-7）
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1）K+生理功能概述
2）科研案例
以水稻幼苗为研究对象，发现了稻瘟病菌M. oryzae通过K+通道破坏免疫的效应蛋白 AvrPiz-t。为研究稻瘟病抗性与外部K+变化的直接关系，课题组检测了野生型及 AvrPiz-t转基因型水稻活体根的分生区的K+流变化过程。结果显示：相对于野生型，转基因型水稻的K+吸收速率在外部K+浓度为0.1mM时明显降低；但在0.1mM时，无明显差异。且流速测定与K+含量测定的结果一致。这些数据表明：AvrPiz-t会部分抑制水稻中K+的吸收，病原体通过调节宿主的K+通道抑制宿主免疫反应，为病原介导的植物营养途径的扰动，其分子机制提供了新的认识。（Shi X, Long Y, He F, et al. The fungal pathogen Magnaporthe oryzae suppresses innate immunity by modulating a host potassium channel. PLoS Pathog. 2018;14(1):e1006878. Published 2018 Jan 31. doi:10.1371/journal.ppat.1006878）
五、可以检测哪些样品
1、动物样品
1）细胞
神经细胞、肿瘤细胞、巨噬细胞、淋巴细胞等
2）组织器官
肿瘤、皮肤、胃粘膜、胰岛、脑（海马体等）、胚胎（大鼠、鱼）、斑马鱼皮肤/鳃、耳蜗、心脏（香螺）、卵（鱼、鸡蛋、爪蟾）、骨骼、角膜、脊椎（豚鼠）、肌肉组织（肌纤维、心肌）
3）其它动物样品
珊瑚、螨虫、昆虫（果蝇幼虫的肠、蟑螂血脑屏障、按蚊、长红锥蝽）、蝌蚪、水蛭、蓝蟹（微感毛）、变形虫、水丝蚓
2、植物样品
1）营养器官
茎：边材、心材、微管形成层、木质部
2）生殖器官
花：花瓣、花瓣表皮细胞、花粉
种子：整体、胚
果实：果壳、果皮、果肉（苹果、柑橘）、籽粒、棉花纤维、棉桃
3）细胞：植物悬浮细胞、液泡
4）愈伤组织
3、微生物样品
酵母细胞、菌丝、菌落、微藻、细菌（大肠杆菌）
4、其它生物样品
周丛生物
5、非生物样品
金属、混凝土、泥沙、纳米材料、生物医药材料
六、样品需要做哪些前处理
非损伤微测技术最大的特点就是活体、无损检测，因此动植物材料在检测前，不需要任何的液氮速冻、染色、研磨处理等。
1、动物单细胞
因NMT是活体检测，故从培养箱中拿出来后，置于培养皿中，直接检测即可
2、动物组织
因NMT是活体检测，无需提前处理。如检测部位天然暴露在外，如斑马鱼皮肤离子细胞、侧线毛细胞，直接检测即可。如检测部位位于体内，需在检测时暴露出检测部位（可采用麻醉的方式），后检测即可。
3、植物根茎叶等组织器官
天然暴露在外的组织器官，例如根、茎、叶的表面，无需任何处理，直接检测即可。水培、土培、砂培、平板培养均可。
4、植物原生质体/液泡
因NMT是基于微传感器/探针的非损伤检测，检测时不接触样品，故原生质体、液泡需要从组织或者细胞中，提取出来后检测。
5、植物叶片的表皮细胞、叶肉细胞、盐腺细胞、保卫细胞
无需提前处理。因这些细胞处于组织内部，故检测时采用撕取等方式，暴露出相应细胞即可。
6、植物花粉管
离体萌发：在培养皿中萌发一段时间后即可直接检测；在体萌发：将柱头置于培养皿中，待萌发一段时间后即可直接检测。
7、植物果实
无需提前处理。如待测部位位于果实内部，需在检测前暴露出相应部门即可。
8、植物悬浮细胞
无需提前处理。检测时，置于培养皿中检测即可。
七、有哪些检测方式？
即瞬时处理，是指在检测过程中，在正常测试液中瞬间加入所需的干旱胁迫溶液（PEG或甘露醇等溶液）的处理方法，目的是为了观察瞬间干旱胁迫下，样品短时间内的离子/分子的变化趋势，即短时效应。
2、预处理/提前处理好后检测
是指在干旱胁迫一段较长的时间后（数十分钟/数小时/数天），观察植物离子/分子进出的情况，即长时效应。
八、检测环境是空气还是溶液
检测时，只要求待测部位浸于溶液中（无需整体都浸在溶液里）。
九、样品是如何检测的
十、可以送样检测吗
可以送样检测。目前非损伤微测技术测试服务由中关村NMT产业联盟统筹管理，由遍布全国的22家NMT创新平台服务中心，提供检测服务。点击获取测试服务
