温度胁迫研究NMT标准化方案
温度胁迫研究NMT标准化方案
一、视频资源
二、参考文献
C2019-028，种康，中国科院植物所植物分子生理学重点实验室，J of integr plant biol ，水稻，根，Ca2+
OsCIPK7 point-mutation leads to conformation and kinase-activity change for sensing cold response
C2019-029，李衍素、于贤昌，中国农业科学院蔬菜与花卉研究所，BMC Plant Biol，根毛区，NO3-、NH4+
C2016-001，陈少良，北京林业大学，PLANT CELL TISS ORG，悬浮细胞，Ca2+/K+
C2015-005，种康，中科院植物所，Cell，根，Ca2+
三、常测哪些指标
Ca2+、H+
四、检测这些离子流、分子流，有什么生物学意义
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2）科研案例
冷胁迫时COLD1与G蛋白α亚基相互作用激活Ca2+通道，触发下游耐寒的防御反应，而后加速G蛋白GTP酶活性，最终揭示了通过驯化得到的COLD1等位基因和特异SNP赋予水稻耐寒性的新机制。研究利用NMT检测了不同水稻品种在低温胁迫下Ca2+的流速，为水稻冷胁迫下Ca2+通道的激活提供了直接的依据。
Ma Y, et al. COLD1 Confers Chilling Tolerance in Rice. Cell., 2015,160(6):1209-21.
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1）H+生理功能概述
2）科研案例
对云杉和冷杉这两种针叶树种进行了一年四季持续的夜间增温，以研究秋季根系和叶片的形态和生理响应。结果表明，夜间增温显著增加了云杉的净H+外排。结合的检测结果、光合、生长特性和其他离子通量的实验结果，表明，夜间增温可提高晚秋叶片光合速率，增加根系对氮的吸收能力。
五、可以检测哪些样品
1、动物样品
1）细胞
神经细胞、肿瘤细胞、巨噬细胞、淋巴细胞等
2）组织器官
肿瘤、皮肤、胃粘膜、胰岛、脑（海马体等）、胚胎（大鼠、鱼）、斑马鱼皮肤/鳃、耳蜗、心脏（香螺）、卵（鱼、鸡蛋、爪蟾）、骨骼、角膜、脊椎（豚鼠）、肌肉组织（肌纤维、心肌）
3）其它动物样品
珊瑚、螨虫、昆虫（果蝇幼虫的肠、蟑螂血脑屏障、按蚊、长红锥蝽）、蝌蚪、水蛭、蓝蟹（微感毛）、变形虫、水丝蚓
2、植物样品
1）营养器官
茎：边材、心材、微管形成层、木质部
2）生殖器官
花：花瓣、花瓣表皮细胞、花粉
种子：整体、胚
果实：果壳、果皮、果肉（苹果、柑橘）、籽粒、棉花纤维、棉桃
3）细胞：植物悬浮细胞、液泡
4）愈伤组织
3、微生物样品
酵母细胞、菌丝、菌落、微藻、细菌（大肠杆菌）
4、其它生物样品
周丛生物
5、非生物样品
金属、混凝土、泥沙、纳米材料、生物医药材料
六、样品需要做哪些前处理
国际领先的非损伤微测技术最大的特点就是活体、无损检测，因此动植物材料在检测前，不需要任何的液氮速冻、染色、研磨处理等。
1、动物单细胞
因NMT是活体检测，故从培养箱中拿出来后，置于培养皿中，直接检测即可。
2、动物组织
因NMT是活体检测，无需提前处理。如检测部位天然暴露在外，如斑马鱼皮肤离子细胞、侧线毛细胞，直接检测即可。如检测部位位于体内，需在检测时暴露出检测部位（可采用麻醉的方式），后检测即可。
3、植物根茎叶等组织器官
天然暴露在外的组织器官，例如根、茎、叶的表面，无需任何处理，直接检测即可。水培、土培、砂培、平板培养均可。
4、植物原生质体/液泡
因NMT是基于微传感器/探针的非损伤检测，检测时不接触样品，故原生质体、液泡需要从组织或者细胞中，提取出来后检测。
5、植物叶片的表皮细胞、叶肉细胞、盐腺细胞、保卫细胞
无需提前处理。因这些细胞处于组织内部，故检测时采用撕取等方式，暴露出相应细胞即可。
6、植物花粉管
离体萌发：在培养皿中萌发一段时间后即可直接检测；在体萌发：将柱头置于培养皿中，待萌发一段时间后即可直接检测。
7、植物果实
无需提前处理。如待测部位位于果实内部，需在检测前暴露出相应部位即可。
8、植物悬浮细胞
无需提前处理。检测时，置于培养皿中检测即可。
七、 实验时有哪些检测方式？
即瞬时处理，是指在检测过程中，在正常测试液中瞬间加入所需的干旱胁迫溶液（PEG或甘露醇等溶液）的处理方法，目的是为了观察瞬间干旱胁迫下，样品短时间内的离子/分子的变化趋势，即短时效应。
2、预处理/提前处理好后检测
是指在干旱胁迫一段较长的时间后（数十分钟/数小时/数天），观察植物离子/分子进出的情况，即长时效应。
八、检测环境是空气还是溶液
检测时，只要求待测部位浸于溶液中（无需整体都浸在溶液里）。
九、 样品是如何检测的？
十、可以送样检测吗
可以送样检测。目前非损伤微测技术测试服务由中关村NMT产业联盟统筹管理，由遍布全国的25家NMT创新平台服务中心，提供检测服务。点击获取测试服务
