NMT原理

NMT技术原理（以液泡H⁺流速测定为例）

       从烟草叶片细胞中分离出完整的液泡，可以在显微镜下清晰地观察到，直径为15-40 µm。把含有液泡的溶液加入到用多聚赖氨酸处理过的盖玻片上静止3-5 min，然后换上新鲜的测试液清洗1次，再加入新鲜的测试液，然后在非损伤微测系统上进行测量。正常情况下，液泡膜没有明显的Na⁺和H⁺转运，当加入50 mM NaCl后，胞外的Na⁺浓度显著提高，激活了液泡膜上的Na⁺/H⁺交换体（NHX），导致Na⁺进入（黄色的点），H⁺排出（红色的点）。使用非损伤微测系统的H⁺选择性微电极在液泡膜外表面进行持续测定，离液泡膜表面的近点p1测定后运动到远点p2测定，然后回到p1，这样实时测定，可以获得两点之间的H⁺浓度差随时间变化的结果，p1和p2之间的距离是dx（已知，单位是µm），D₀是H⁺在常温常压下的扩散常数。因此，通过Fick’s第一扩散定律（J=D₀•dc/dx）计算得到H⁺的流速JH⁺，单位是pmol•cm^-2•s^-1，即每秒通过每平方厘米面积上的H⁺的数量（摩尔数，10^-12 mol）。

       

参考文献：

1. Jaffe LF and Nuccitelli R. An ultrasensitive vibrating probe for measuring steady extracellular currents. Journal of Cell Biology, 1974, 63: 614-628.

2. Kühtreiber WM and Jaffe LF. Detection of extracellular calcium gradients with a calcium specific vibrating electrode. Journal of Cell Biology, 1990, 110: 1565-1573.

3. Chen XY, et al. Modified noninvasive microtest electrophysiological technology for vacuolar H+ flux detection. Analytical Biochemistry, In Press, Corrected Proof, Available online 22 July 2011.

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