“NMT原理”的版本间的差异
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| − | 从烟草叶片细胞中分离出完整的液泡，可以在显微镜下清晰地观察到，直径为15-40 µm。把含有液泡的溶液加入到用多聚赖氨酸处理过的盖玻片上静止3-5 min，然后换上新鲜的测试液清洗1次，再加入新鲜的测试液，然后在非损伤微测系统上进行测量。正常情况下，液泡膜没有明显的Na<sup>+</sup>和H<sup>+</sup>转运，当加入50 mM NaCl后，胞外的Na<sup>+</sup>浓度显著提高，激活了液泡膜上的Na<sup>+</sup>/H<sup>+</sup>交换体（NHX），导致Na<sup>+</sup>进入（黄色的点），H<sup>+</sup>排出（红色的点）。使用非损伤微测系统的H<sup>+</sup>选择性微电极在液泡膜外表面进行持续测定，离液泡膜表面的近点p1测定后运动到远点p2测定，然后回到p1，这样实时测定，可以获得两点之间的H<sup>+</sup>浓度差随时间变化的结果，p1和p2之间的距离是dx（已知，单位是µm），D<sub>0</sub>是H<sup>+</sup>在常温常压下的扩散常数。因此，通过Fick’s第一扩散定律（J=D<sub>0</sub>•dc/dx）计算得到H<sup>+</sup>的流速JH<sup>+</sup>，单位是pmol•cm<sup>-2</sup>•s<sup>-1</sup>，即每秒通过每平方厘米面积上的H+的数量（摩尔数，10<sup>-12</sup> mol）。 | + | : 从烟草叶片细胞中分离出完整的液泡，可以在显微镜下清晰地观察到，直径为15-40 µm。把含有液泡的溶液加入到用多聚赖氨酸处理过的盖玻片上静止3-5 min，然后换上新鲜的测试液清洗1次，再加入新鲜的测试液，然后在非损伤微测系统上进行测量。正常情况下，液泡膜没有明显的Na<sup>+</sup>和H<sup>+</sup>转运，当加入50 mM NaCl后，胞外的Na<sup>+</sup>浓度显著提高，激活了液泡膜上的Na<sup>+</sup>/H<sup>+</sup>交换体（NHX），导致Na<sup>+</sup>进入（黄色的点），H<sup>+</sup>排出（红色的点）。使用非损伤微测系统的H<sup>+</sup>选择性微电极在液泡膜外表面进行持续测定，离液泡膜表面的近点p1测定后运动到远点p2测定，然后回到p1，这样实时测定，可以获得两点之间的H<sup>+</sup>浓度差随时间变化的结果，p1和p2之间的距离是dx（已知，单位是µm），D<sub>0</sub>是H<sup>+</sup>在常温常压下的扩散常数。因此，通过Fick’s第一扩散定律（J=D<sub>0</sub>•dc/dx）计算得到H<sup>+</sup>的流速JH<sup>+</sup>，单位是pmol•cm<sup>-2</sup>•s<sup>-1</sup>，即每秒通过每平方厘米面积上的H<sup>+</sup>的数量（摩尔数，10<sup>-12</sup> mol）。 |
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2018年1月2日 (二) 14:01的最新版本
NMT技术原理（以液泡H+流速测定为例）
- 从烟草叶片细胞中分离出完整的液泡，可以在显微镜下清晰地观察到，直径为15-40 µm。把含有液泡的溶液加入到用多聚赖氨酸处理过的盖玻片上静止3-5 min，然后换上新鲜的测试液清洗1次，再加入新鲜的测试液，然后在非损伤微测系统上进行测量。正常情况下，液泡膜没有明显的Na+和H+转运，当加入50 mM NaCl后，胞外的Na+浓度显著提高，激活了液泡膜上的Na+/H+交换体（NHX），导致Na+进入（黄色的点），H+排出（红色的点）。使用非损伤微测系统的H+选择性微电极在液泡膜外表面进行持续测定，离液泡膜表面的近点p1测定后运动到远点p2测定，然后回到p1，这样实时测定，可以获得两点之间的H+浓度差随时间变化的结果，p1和p2之间的距离是dx（已知，单位是µm），D0是H+在常温常压下的扩散常数。因此，通过Fick’s第一扩散定律（J=D0•dc/dx）计算得到H+的流速JH+，单位是pmol•cm-2•s-1，即每秒通过每平方厘米面积上的H+的数量（摩尔数，10-12 mol）。
参考文献：
1. Jaffe LF and Nuccitelli R. An ultrasensitive vibrating probe for measuring steady extracellular currents. Journal of Cell Biology, 1974, 63: 614-628.
2. Kühtreiber WM and Jaffe LF. Detection of extracellular calcium gradients with a calcium specific vibrating electrode. Journal of Cell Biology, 1990, 110: 1565-1573.
3. Chen XY, et al. Modified noninvasive microtest electrophysiological technology for vacuolar H+ flux detection. Analytical Biochemistry, In Press, Corrected Proof, Available online 22 July 2011.
